影響液相色譜柱使用壽命的因素

 流動相對液相色譜柱使用壽命的影響

 

液相色譜儀在以水溶液為流動相時(shí)，水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長，當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí)，一些霉菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問世，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um，流動相中的顆粒雜質(zhì)很容易先沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動相的pH值對色譜柱也有影響，特別是對化學(xué)鍵合硅膠填料，水溶液的pH蕞適范圍在2~7.5之間，當(dāng)pH>8時(shí)，硅膠會釋出生成絮狀物堵塞柱子且難以復(fù)原，柱效很快降低，甚至完全失效。當(dāng)在緩沖液中加入有機(jī)溶劑例如甲醇或乙腈時(shí)，鹽類的溶解度下降，會析出鹽沉淀，堵塞柱子。同時(shí)流動相中的有機(jī)溶劑和鹽會腐蝕色譜柱頭的篩板，產(chǎn)生柱頭凹陷。流動相的極性對柱子也有一定影響，對于硅膠柱，甲醇、水、冰乙酸等極性較大物質(zhì)會破壞填料，反之，對于化學(xué)鍵合硅膠，極性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。

 

 樣品和固定相對液相色譜柱使用壽命的影響

 

液相色譜儀如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動相中，在通過固定相會堵塞柱子。樣品中的顆粒雜質(zhì)也會堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過柱子時(shí)會產(chǎn)生不可逆吸附，這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。樣品組分還會與固定相產(chǎn)生反應(yīng)，尤其是對于氨基柱的影響較為嚴(yán)重，因?yàn)榘被着c酐、酮形成希夫（Schiff）縮合而減少活性點(diǎn)，使保留時(shí)間縮短。色譜柱鍵合相基團(tuán)脫落、固定相分解和活性基團(tuán)變性以及會影響柱效和保留時(shí)間的顯著改變。大多數(shù)鍵合相都是通過硅氧硅鍵（Si-O-Si）連接在硅基質(zhì)上，形成帶有有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R（R為CnH2n+1），硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂，使鍵合基團(tuán)脫落。

 

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